Fluorescentna mikroskopija je revolucionirala našu sposobnost vizualizacije i proučavanja bioloških uzoraka, omogućavajući nam da uronimo u zamršeni svijet ćelija i molekula. Ključna komponenta fluorescentne mikroskopije je izvor svjetlosti koji se koristi za pobuđivanje fluorescentnih molekula unutar uzorka. Tokom godina korišteni su različiti izvori svjetlosti, svaki sa svojim jedinstvenim karakteristikama i prednostima.
1. Živina lampa
Živina lampa visokog pritiska, u rasponu od 50 do 200 vati, izrađena je od kvarcnog stakla i sfernog je oblika. U sebi sadrži određenu količinu žive. Kada radi, između dvije elektrode dolazi do pražnjenja, što uzrokuje isparavanje žive, a unutrašnji pritisak u sferi brzo raste. Ovaj proces obično traje oko 5 do 15 minuta.
Emisija živine lampe visokog pritiska je rezultat raspadanja i redukcije molekula žive tokom pražnjenja elektrode, što dovodi do emisije svetlosnih fotona.
Emituje jako ultraljubičasto i plavo-ljubičasto svjetlo, što ga čini pogodnim za pobuđivanje različitih fluorescentnih materijala, zbog čega se široko koristi u fluorescentnoj mikroskopiji.
2. Xenon lampe
Drugi često korišćeni izvor bele svetlosti u fluorescentnoj mikroskopiji je ksenonska lampa. Ksenonske lampe, kao i živine, pružaju širok spektar talasnih dužina od ultraljubičastih do blizu infracrvenih. Međutim, razlikuju se po spektru ekscitacije.
Živine lampe koncentrišu svoju emisiju u skoro ultraljubičastom, plavom i zelenom području, što osigurava generiranje svijetlih fluorescentnih signala, ali dolazi sa jakom fototoksičnošću. Shodno tome, HBO lampe su obično rezervisane za fiksne uzorke ili slabu fluorescentnu sliku. Nasuprot tome, izvori ksenonskih lampi imaju glatkiji profil pobude, omogućavajući poređenje intenziteta na različitim talasnim dužinama. Ova karakteristika je prednost za primjene kao što je mjerenje koncentracije kalcijevih jona. Ksenonske lampe takođe pokazuju jaku ekscitaciju u bliskom infracrvenom opsegu, posebno oko 800-1000 nm.
XBO lampe imaju sledeće prednosti u odnosu na HBO lampe:
① Ujednačeniji spektralni intenzitet
② Jači spektralni intenzitet u infracrvenom i srednjem infracrvenom području
③ Veći izlaz energije, što olakšava dostizanje otvora objektiva.
3. LED diode
Posljednjih godina pojavio se novi konkurent u području izvora svjetlosti za fluorescentnu mikroskopiju: LED diode. LED diode nude prednost brzog uključivanja i isključivanja u milisekundama, smanjujući vrijeme izlaganja uzorku i produžujući vijek trajanja osjetljivih uzoraka. Nadalje, LED svjetlo pokazuje brzo i precizno raspadanje, značajno umanjujući fototoksičnost tokom dugotrajnih eksperimenata na živim ćelijama.
U poređenju sa izvorima bele svetlosti, LED diode obično emituju unutar užeg spektra pobude. Međutim, dostupno je više LED traka, što omogućava raznovrsne primjene fluorescencije u više boja, što LED diode čini sve popularnijim izborom u modernim postavkama fluorescentne mikroskopije.
4. Laserski izvor svjetlosti
Laserski izvori svjetlosti su vrlo monokromatski i usmjereni, što ih čini idealnim za mikroskopiju visoke rezolucije, uključujući tehnike super-rezolucije kao što su STED (Stimulated Emission Depletion) i PALM (PhotoActived Localization Microscopy). Lasersko svjetlo se obično odabire tako da odgovara specifičnoj talasnoj dužini pobude koja je potrebna za ciljni fluorofor, pružajući visoku selektivnost i preciznost u pobuđivanju fluorescencije.
Izbor izvora svjetlosti za fluorescentni mikroskop ovisi o specifičnim eksperimentalnim zahtjevima i karakteristikama uzorka. Slobodno nas kontaktirajte ako vam zatreba pomoć
Vrijeme objave: Sep-13-2023